细胞增殖是生物学研究中的核心课题之一，准确、迅速地评估细胞增殖率对于揭示细胞周期、癌症研究、药物筛选等具有重要意义。EdU-488细胞增殖检测试剂盒，基于先进的点击化学技术（Click Chemistry），提供了一种创新、可靠的细胞增殖检测方法。相比传统的BrdU免疫荧光染色方法，EdU标记在细胞内的扩散性更强，不需要苛刻的样品变性处理，避免了组织损伤，极大提高了实验灵敏度和速度。

产品亮点：

• 高灵敏度：EdU能够有效替代胸苷，在细胞增殖期间迅速标记DNA，尤其适合检测处于S期的细胞。
• 无损伤操作：与传统方法相比，无需酸解、热解等变性步骤，保护细胞结构，减少背景干扰。
• 快速高效：点击反应迅速完成，显著提升了实验的检测速度，节省实验时间。
• 广泛适用：适用于细胞培养、动物实验及组织切片分析，满足各种研究需求。

EdU-488细胞增殖检测试剂盒，让您的细胞增殖研究更精准、更高效，助力科研突破！

使用指南

试剂盒组成：

• PB 10mL：保存于-20℃。
• AC 1mL×2：保存于-20℃（易氧化，使用时需小心处理）。
• CU 400μL：保存于-20℃。
• 488色原 50μL：保存于-20℃。
• 100mg/mL EdU母液 100μL：保存于-20℃。

注意：AC试剂易氧化，不使用时请在-20℃低温下保存，如发现变色，需更换新鲜试剂。

实验流程：

1. 样本处理：

• 动物实验：
  • EdU注射：根据小鼠体重和实验需求，将EdU溶解于PBS，按10-200mg/kg的用量进行注射。常见方式包括腹腔注射、皮下注射、肌肉注射等。一般建议初次使用时按50mg/kg进行测试。
  • 6小时后或根据特定实验确定适当的时间后：处死小鼠，快速取出组织并准备冰冻切片或石蜡切片。
  • 建议任何实验均可取小肠组织检测细胞增殖情况，小肠上皮组织细胞增殖快，成年小鼠EdU注射6小时后即可检测到阳性信息，可用作阳性对照进行预实验。
• 切片处理：

1. 切片前处理：组织器官最好进行清洗，以去除血液、组织中残留的EdU，降低背景。切片厚度：3-10μm为宜，切片过厚可能会影响切片背景及染色效率。
2. 切片后处理——石蜡切片脱蜡：二甲苯脱蜡2次，15分钟/次，梯度乙醇（100%，95%，85%，75%）各一次，5分钟/次，去离子水洗脱1次。
3. 切片后处理——冰冻切片处理：室温放置30分钟后，固定10分钟，PBS清洗3次，每次5分钟。

2. 细胞实验：

• EdU标记：
  • 用细胞培养基与EdU母液按8000：1的比例稀释，制备50μM的EdU培养基。
  • 每孔加入适量50μM的EdU培养基孵育2小时（最佳孵育时间一般为细胞周期的1/10），弃去培养基并PBS清洗细胞3次。
  • EdU培养基和EdU反应液孵育体积可参考下表；

  • 	96孔板	48孔板	24孔板	12孔板	6孔板	5.5cm小皿
    EdU培养基	100μL	200μL	300μL	500μL	1mL	2mL
    EdU反应液	100μL	200μL	300μL	500μL	1mL	2mL

• 细胞固定与通透处理：
  1. 用含4%多聚甲醛的PBS固定细胞15分钟。
  2. 加入0.5% Triton X-100 PBS溶液进行通透处理，再次PBS清洗。

3. EdU反应：

• 按照PB：CU：AC：488色原=860：40：100：5的比例配置EdU反应液。
• 每个样本滴加50-100μL反应液，在室温下避光孵育15-60分钟，弃染色反应液，PBS冲洗3次，每次5分钟。

4. 显微镜观察与数据分析

1. 荧光显微镜观察和拍照：

   • 利用慧蓝生物多通道荧光显微镜进行镜检，根据色原的发射波长选择合适的通道观察切片，根据镜检结果调整Edu注射时间和比例。
   • 拍照可以使用慧蓝生物多通道荧光显微镜配备的相机进行拍照。

2. 扫描仪扫描：HuilanBio扫描仪采用最先进的光学和电子技术，确保每一次扫描都能捕捉到最细微的细节。我们的扫描仪都能提供出色的分辨率和灵敏度，使您的研究数据更加精确和可靠。

3. 数据分析：
   • 利用慧蓝生物Huilan AI分析软件进行半定量分析，记录增殖的细胞位置和数量，获得更加精准的实验数据。

提示：细胞或组织染色完成后，建议及时观察和拍摄，以确保最佳的成像效果。

实验前须知

EdU 的分子量为 252.23，易溶于水、PBS、生理盐水。

对于动物实验，如使用自备EdU 粉末，建议将 EdU 粉末溶解于 DMSO 配制成 100mg/ml 的母液。

EdU 建议初始给药量为 50mg/kg（50μg/g），稀释浓度为 0.5~1mg/mL。小鼠体重20g，需要注射1mg，以1mg/mL计算，需要注射1mL。

• 对于细胞实验， EdU母液质量浓度为100mg/mL，转化为物质的量浓度为400mM，待使用时用细胞完全培养基和EdU母液按8000：1的比例稀释，制备适量50μM的EdU培养基（50μM为推荐浓度。由于细胞类型、培养基种类、细胞密度和增殖速度等多种因素会显著影响EdU在细胞中的掺入量。因此，在首次使用EdU时，建议对其使用浓度进行一些探索和调整。如果您之前已经使用BrdU进行过实验，可以将BrdU的终浓度作为EdU的参考浓度）

文章引用试剂盒/方法：Staining of EdU was performed using a EdU cell proliferation Assay kit ( Huilanbio Biological Technology, Shanghai, China) based on the click chemistry technology according to the manufacture’s instruction.

产品优势总结：

• 无变性处理：免去繁琐的酸解、热解步骤，保护样本。
• 灵敏度高：EdU与DNA结合牢固，能有效标记处于S期的细胞。
• 快速反应：点击反应高效迅速，节省时间。
• 广泛适用：适用于各种类型细胞、组织和动物实验。

EdU-488细胞增殖检测试剂盒，为您的增殖研究提供更加准确、快速和高效的解决方案，助力您的科学探索迈向新高度！