慧蓝生物的组织芯片多重免疫荧光整体解决方案，提供了一种高效且经济的实验分析技术，旨在研究基因或蛋白质在不同细胞或组织中的表达情况。该技术通过将多个小组织样本排列在一张载玻片上，不仅能显著提高实验效率，也能节省样本量，是生命科学研究中不可或缺的工具。
一、组织芯片技术概述
组织芯片（Tissue Microarray, TMA）是一种创新的技术，其核心思想是通过将多个组织样本安排在一张载玻片上，能在有限的空间内实现对多个组织的分析。组织芯片具有以下显著特点：
- 体积小，信息量大：在相同空间内可以放置多个组织样本，获得大量的实验数据。
- 高效实验：一次实验可以同时分析多个组织样本，极大提高实验效率。
- 减少误差：统一的实验处理条件能够减少样本之间的差异，降低实验误差。
- 经济性：节省了实验所需的材料和资源，减少了实验成本。
- 长效保存：组织样本的集中处理，有助于原始样本的长期保存。
- 组织芯片主要分为以下两类：
1、石蜡包埋的组织芯片：适用于常规组织样本的长期保存和后续分析。
2、冰冻芯片：适用于需要快速处理和分析的组织样本
- 组织芯片制作与实验步骤
组织芯片的制作涉及多个步骤，确保了样本的完整性和实验结果的可靠性。主要步骤包括：
- 实验器材
- 供体蜡块
- 空白受体蜡块
（70孔）
（90孔） - 取样器（2.0mm或1.5mm）
- 冰袋
- 烤箱
- 包埋所需模具
- 制作过程
图1：组织芯片切片制备流程图
- 供体蜡块准备：将需要取材的供体蜡块逐一放入40°C加热台，软化4-5分钟。
- 取样：将预热好的供体蜡块，用取样器取样，将样本注入对应的受体蜡块孔中。
- 样本注入：样本注入完成后，统一用干净载玻片压平。
- 加热和冷却：将已经注入样本的受体蜡块放入70°C烤箱中加热30分钟。10分钟时，可观察到受体蜡块呈透明果冻样；完全透明溶和后，拿出冷却。
- 包埋：受体蜡块完全冷却后，用芯片专用包埋框包埋，缓缓放入包埋框，保持液面平衡，逐一慢慢加入蜡液，避免气泡。
- 切片：将已经冷却的芯片蜡块冰冻后进行连续切片。片子先放在冷水中展开，待蜡展开后，转入热水中，待组织展开后，用防脱的载玻片进行捞片。
- 捞片：切好的芯片捞起后，用盒子装好，等待下一步实验。
- 注意事项
- 排序注意事项：排序时要注意是否有遗漏或重复，编号类似的可以排在相邻位置（如：癌和癌旁）。最末一个留白是为了便于辨认排列顺序。
- 取样注意事项：供体蜡块很硬可能会使取样器变钝，导致取样时组织不完整，浪费实验器材。
- 包埋注意事项：包埋时动作要缓慢，注意溶和时间。发入包埋框时动作一定要缓慢，注入蜡液时逐一加入，注意观察是否有气泡。
- 切片注意事项：切片时尽量取所有组织的切面，捞片时确保所有组织在同一张载玻片上。
组织芯片技术通过将多个小组织样本排列在一张载玻片上，实现了高效、经济和多样化的实验分析。其特点和制作过程使其成为研究同一种基因或蛋白质分子在不同细胞或组织中表达情况的重要工具。仔细遵循制作步骤和注意事项，可以确保实验的成功和数据的可靠性。
二、组织芯片多重免疫荧光实验步骤
图2：组织芯片TSA染色流程图
图3：七色多重荧光染色试剂盒 Plus（780二步法版-兔鼠通用二抗）货号（RC0086Plus-B67RM）组分图
1、样本准备：
1）依次将组织芯片切片放入二甲苯Ⅰ 15min-二甲苯Ⅱ 15min-无水乙醇Ⅰ 5min-无水乙醇Ⅱ 5min-95%乙醇 5min-85%乙醇 5min-75%乙醇 5min，蒸馏水洗。
2、抗原修复：
抗原修复的目的是组织固定时，抗原表位被覆盖，需将抗原表位暴露出来。可以将组织切片置于盛满 PH值为9.0的EDTA 碱性抗原修复液，或者 PH值为6.0的柠檬酸修复缓冲液的修复盒中，于微波炉内进行抗原修复（也可以将切片架置于 95 摄氏度修复液中水浴 30分钟等其他热修复方法）。抗原修复液推荐使用我司EDTA9.0抗原修复液（货号：RC04）和柠檬酸抗原修复液（货号：RC03）。
3 、阻断内源性过氧化物酶：切片放入 3%过氧化氢溶液，室温避光孵育 15 min ，将玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min。
4 、非特异性靶点封闭:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（防止抗体流走），在圈内滴加用抗体稀释液（或者其他封闭液 3%BSA或者山羊血清）均匀覆盖组织，室温封闭 30min 。额外说明：抗体稀释液内含有各种保护剂以及防腐剂，可以用来封闭或者稀释一抗，稀释后的一抗可以长期四度保存（在常温下也可以保存一个月之久）
5 、加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加用抗体稀释液稀释好的的一抗X，切片平放于避光湿盒内4°C孵育过夜或者37°C1-2h（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）；
6 、加 hrp 二抗：玻片置于 PBS（PH7.4） 中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min 。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的HRP二抗覆盖组织，避光室温孵育 50min ，PBS 洗三次。额外说明：本试剂盒内自带的HRP山羊抗兔/鼠通用二抗为即用型，具有超高灵敏度，随时可用，无需配置。
7 、TSA 荧光染料反应液反应：浓缩型荧光染料与 TSA buffer 按照 1:50- 1:200 的比例混合均匀，切片滴加配 好的 TSA 荧光染料反应液均匀覆盖组织室温反应 1- 15min（最佳时间 5min- 10min），PBS 洗三次（预实验 可先染 1min洗干净荧光染料后显微镜下观察染色效果，如果阳性弱继续滴加荧光染料加强染色强度直至合适强度后继续进行下一步）。
8 、抗体洗脱：将切片置于抗原修复液中 95 度水浴 25-40min（根据不同抗体亲和力灵活调整时间）
9 、 重复 3-8 步骤（换用另外一种 TYR-XXXPLus 荧光染料）---第二至N轮标记
11、DAPI 复染细胞核：在最后一个指标显色完成后，玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min 。切片稍甩干后在圈内滴加 DAPI 即用型染液，避光室温孵育 5min-20min。
12 、封片：玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min 。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片（推荐使用我司抗荧光淬灭封片剂，货号：RC07/RC06）。
三、扫描设备与图像分析
慧蓝生物提供的扫描仪和图像分析软件，结合强大的硬件与软件优势，能够为多重免疫荧光实验提供全方位的解决方案。
- 高性能扫描仪——Huilanbio扫描仪（货号：HL-Scanner）
图4：Huilanbio 扫描仪图
设备支持明场和荧光双模态成像，多达7个荧光通道支持定制化配置，适配各种实验需要， 可根据需要灵活切换，帮助科研人员精准获取组织切片的图像数据。
- 物镜选择：配备UPlanApo物镜，支持10X、20X、40X等多种倍率选择，能够从宏观到微观全方位观察组织样本。
- 高分辨率成像：配备高性能的双1/1.2" 2.3MP CMOS相机，具备160帧每秒的高速采集能力，能够精确还原每个细胞的细节。
- 超高轴行程：设备轴行程为58mm，确保大范围扫描时仍保持高精度，避免定位误差带来的图像模糊。
- 图像分析软件——Huilanbio AI图像分析软件
慧蓝生物自主研发的Huilanbio AI图像分析软件，可以对样本进行深入分析，包括：
- 细胞数统计：精确计算样本中的总细胞数。
- 阳性细胞分析：根据免疫荧光染色结果，精确计算阳性细胞的数量及阳性率。
- 共标分析：对于多重免疫荧光染色，能够进行共标阳性细胞数及其阳性率的统计，提供更加全面的实验数据支持。
图5：组织芯片分析结果图片
图6：组织芯片分析结果单点位细节分析图片
慧蓝生物的组织芯片多重免疫荧光整体解决方案，可为您提供：
| 类别 | 品牌 |
产品编号 |
产品名称 |
产品规格 |
目录价 |
| 多重免疫荧光试剂盒 | 慧蓝生物 | RC0086plus-23RM | 三色多重免疫荧光试剂盒Plus版（兔鼠通用二抗） | 100T | ￥3,980 |
| 慧蓝生物 | RC0086plus-23R | 三色多重免疫荧光试剂盒Plus版（兔二抗） | 100T | ￥3,980 | |
| 慧蓝生物 | RC0086plus-34RM | 四色多重免疫荧光试剂盒Plus版（兔鼠通用二抗） | 100T | ￥4,980 | |
| 慧蓝生物 | RC0086plus-34R | 四色多重免疫荧光试剂盒Plus版（兔二抗） | 100T | ￥4,980 | |
| 慧蓝生物 | RC0086plus-45RM | 五色多重免疫荧光试剂盒Plus版（兔鼠通用二抗） | 100T | ￥7,680 | |
| 慧蓝生物 | RC0086plus-45R | 五色多重免疫荧光试剂盒Plus版（兔二抗） | 100T | ￥7,680 | |
| 慧蓝生物 | RC0086plus-56RM | 六色多重免疫荧光试剂盒Plus版（兔鼠通用二抗） | 100T | ￥9,980 | |
| 慧蓝生物 | RC0086plus-56R | 六色多重免疫荧光试剂盒Plus版（兔二抗） | 100T | ￥9,980 | |
| 慧蓝生物 | RC0086plus-67RM | 七色多重免疫荧光试剂盒Plus版（兔鼠通用二抗） | 100T | ￥13,580 | |
| 慧蓝生物 | RC0086plus-67R | 七色多重免疫荧光试剂盒Plus版（兔二抗） | 100T | ￥13,580 | |
| 慧蓝生物 | RC0086Plus-B67RM | 七色多重荧光染色试剂盒 Plus（780二步法版-兔鼠通用二抗） | 100T | ￥14,580 | |
| 慧蓝生物 | RC0086Plus-B67R | 七色多重荧光染色试剂盒 Plus（780二步法版-兔二抗） | 100T | ￥14,580 | |
| 慧蓝生物 | RC0086plus-78RM | 八色多重免疫荧光试剂盒Plus版（兔鼠通用二抗） | 100T | ￥16,800 | |
| 慧蓝生物 | RC0086plus-78R | 八色多重免疫荧光试剂盒Plus版（兔二抗） | 100T | ￥16,800 | |
| 慧蓝生物 | RC0086plus-89RM | 九色多重免疫荧光试剂盒Plus版（兔鼠通用二抗） | 100T | ￥19,980 | |
| 慧蓝生物 | RC0086plus-89R | 九色多重免疫荧光试剂盒Plus版（兔二抗） | 100T | ￥19,980 | |
| 成像设备 | 慧蓝生物 | HL-Scanner | Huilanbio 扫描仪 | ||
| 分析软件 | 慧蓝生物 | HL-FX | Huilan AI图像分析软件 |
此外，慧蓝生物还提供一站式检测服务：
| 类别 |
服务项目编号 |
服务项目名称 |
产品规格 |
目录价 |
| 标本前处理 |
HL-service-1-9 | 石蜡包埋的组织芯片制备 | ||
| HL-service-1-5 | 芯片防脱切片（世泰防脱玻片） | 张 | ￥20 | |
TSA染色服务 |
HL-service-5-1 | 组织芯片-单标免疫荧光 | 张 | ￥300 |
| HL-service-5-2 | 组织芯片-双标三色免疫荧光 | 张 | ￥800 | |
| HL-service-5-3 | 组织芯片-三标四色免疫荧光 | 张 | ￥1500 | |
| HL-service-5-4 | 组织芯片-四标五色免疫荧光 | 张 | ￥2000 | |
| HL-service-5-5 | 组织芯片-五标六色免疫荧光 | 张 | ￥2500 | |
| HL-service-5-6 | 组织芯片-六标七色免疫荧光 | 张 | ￥3000 | |
| TSA染色+扫描 | HL-service-7-1 | 组织芯片-单标免疫荧光（染色+扫描） | 张 | ￥1500 |
| HL-service-7-2 | 组织芯片-双标三色免疫荧光（染色+扫描） | 张 | ￥2500 | |
| HL-service-7-3 | 组织芯片-三标四色免疫荧光（染色+扫描） | 张 | ￥4500 | |
| HL-service-7-4 | 组织芯片-四标五色免疫荧光（染色+扫描） | 张 | ￥10000 | |
| HL-service-7-5 | 组织芯片-五标六色免疫荧光（染色+扫描） | 张 | ￥14000 | |
| HL-service-7-6 | 组织芯片-六标七色免疫荧光（染色+扫描） | 张 | ￥18000 | |
| TSA染色+扫描+分析 | HL-service-9-1 | 组织芯片-单标免疫荧光（染色+扫描+分析） | 张 | 染色+扫描的价格基础上 加上分析收费：30元/点/指标 |
| HL-service-9-2 | 组织芯片-双标三色免疫荧光（染色+扫描+分析） | 张 | ||
| HL-service-9-3 | 组织芯片-三标四色免疫荧光（染色+扫描+分析） | 张 | ||
| HL-service-9-4 | 组织芯片-四标五色免疫荧光（染色+扫描+分析） | 张 | ||
| HL-service-9-5 | 组织芯片-五标六色免疫荧光（染色+扫描+分析） | 张 | ||
| HL-service-9-6 | 组织芯片-六标七色免疫荧光（染色+扫描+分析） | 张 |
慧蓝生物助力广大科研客户提供一站式完整多重免疫荧光的整体解决方案。
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