一、 取材

新鲜组织: 尽量使用新鲜组织，离体后尽快固定，避免自溶。

组织大小: 厚度不超过5mm，面积不超过2cm²，过大影响固定和脱水。

取材要求: 1.使用锋利刀具，避免挤压组织2.不同组织应分开标记，避免混淆。

二、 固定

固定液选择: 常用10%中性福尔马林或者4%多聚甲醛，特殊组织或者特殊染色需选用专用固定液。

固定时间: 一般为24-48小时，视组织大小和类型调整。

固定要求: 需完全浸没组织，体积为组织的10-50倍，固定容器不能太小，组织在固定液里能自由晃动。

三、 脱水

梯度脱水: 依次使用不同浓度乙醇（如70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%），每步1-2小时。

脱水彻底: 确保组织完全脱水，避免影响透明和浸蜡。

四、 透明

透明剂选择: 常用二甲苯作为透明剂。

透明时间: 每步30分钟至1小时，至组织透明。

五、 浸蜡

石蜡选择: 选择合适熔点的石蜡。

浸蜡时间: 每步1-2小时，共2-3次，确保石蜡充分渗透。

六、 包埋

包埋模具: 选择合适大小的模具，避免组织变形。

石蜡温度: 略高于石蜡熔点，避免气泡产生。

组织摆放: 确保组织切面朝下，位置居中。

七、 切片

切片机: 使用锋利刀片，调整切片厚度（石蜡切片通常3-5μm）。

切片要求: 组织完整，避免切片褶皱或断裂。

展片: 将切片放入43℃左右温水中展平，再贴附于载玻片上。

八、 烤片

烤片温度: 60-65℃左右，烤片2-4小时，使切片牢固附着。

上机脱水是从酒精脱水到浸蜡的过程，不同大小、类型的组织脱水时间不一样，大致脱水流程如下图所示

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