细胞增殖是生物学研究中的核心课题之一，准确、迅速地评估细胞增殖率对于揭示细胞周期、癌症研究、药物筛选等具有重要意义。
慧蓝生物EdU增殖试剂盒基于先进的点击化学技术（Click Chemistry），提供了一种创新、可靠的细胞增殖检测方法。相比传统的BrdU免疫荧光染色方法，EdU标记在细胞内的扩散性更强，不需要苛刻的样品变性处理，避免了组织损伤，极大提高了实验灵敏度和速度。
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产品编号 |
产品名称 |
产品规格 |
目录价格 |
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Edu增殖 试剂盒 |
RCF043 |
200T |
￥1,350 |
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RCF041 |
200T |
￥1,350 |
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RCF042 |
200T |
￥1,350 |
一、慧蓝生物EDU试剂盒优势
1、高灵敏度
EdU能够有效替代胸苷，在细胞增殖期间迅速标记DNA，尤其适合检测处于S期的细胞。
2、无损伤操作
与传统方法相比，无需酸解、热解等变性步骤，保护细胞结构，减少背景干扰。
3、快速高效
点击反应迅速完成，显著提升了实验的检测速度，节省实验时间。
4、广泛适用
适用于细胞培养、动物实验及组织切片分析，满足各种研究需求。
EdU增殖试剂盒，让您的细胞增殖研究更精准、更高效，助力科研突破！
二、慧蓝生物EDU试剂盒组成
· PB 10mL：保存于-20℃。
· AC 1mL×2：保存于-20℃（易氧化，使用时需小心处理）。
· CU 400μL：保存于-20℃。
· 488色原/555色原/647色原 50μL：保存于-20℃。
· 100mg/mL EdU母液100μL：保存于-20℃。
注意：AC试剂易氧化，不使用时请在-20℃低温下保存，如发现变色，需更换新鲜试剂。
三、实验步骤
1、样本处理
- 动物实验
（1）EdU注射：根据小鼠体重和实验需求，将EdU溶解于PBS，按10-200mg/kg的用量进行注射。常见方式包括腹腔注射、皮下注射、肌肉注射等。一般建议初次使用时按50mg/kg进行测试。
（2） 6小时后或根据特定实验确定适当的时间后：处死小鼠，快速取出组织并准备冰冻切片或石蜡切片。
（3） 建议任何实验均可取小肠组织检测细胞增殖情况，小肠上皮组织细胞增殖快，成年小鼠EdU注射6小时后即可检测到阳性信息，可用作阳性对照进行预实验。
- 切片处理
（1）切片前处理：组织器官最好进行清洗，以去除血液、组织中残留的EdU，降低背景。
（2）切片厚度：3-10μm为宜，切片过厚可能会影响切片背景及染色效率。
（3）切片后处理——石蜡切片脱蜡：二甲苯脱蜡2次，15分钟/次，梯度乙醇（100%，95%，85%，75%）各一次，5分钟/次，去离子水洗脱1次。
（4）切片后处理——冰冻切片处理：室温放置30分钟后，固定10分钟，PBS清洗3次，每次5分钟。
2、细胞实验
- EdU标记
（1） 用细胞培养基与EdU母液按8000：1的比例稀释，制备50μM的EdU培养基。
（2）每孔加入适量50μM的EdU培养基孵育2小时（最佳孵育时间一般为细胞周期的1/10），弃去培养基并PBS清洗细胞3次。
· EdU培养基和EdU反应液孵育体积可参考下表：
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96孔板 |
48孔板 |
24孔板 |
12孔板 |
6孔板 |
5.5cm 小皿 |
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EdU 培养基 |
100μL |
200μL |
300μL |
500μL |
1mL |
2mL |
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EdU 反应液 |
100μL |
200μL |
300μL |
500μL |
1mL |
2mL |
- 细胞固定与通透处理
（1） 用含4%多聚甲醛的PBS固定细胞15分钟。
（2） 加入0.5% Triton X-100 PBS溶液进行通透处理，再次PBS清洗。
3、EDU反应
（1） 按照PB：CU：AC：488色原=860：40：100：5的比例配置EdU反应液。
（2）每个样本滴加50-100μL反应液，在室温下避光孵育15-60分钟，弃染色反应液，PBS冲洗3次，每次5分钟。
4、显微镜观察与数据分析
荧光显微镜观察和拍照
· 利用慧蓝生物多通道荧光显微镜进行镜检，根据色原的发射波长选择合适的通道观察切片，根据镜检结果调整Edu注射时间和比例。
· 拍照可以使用慧蓝生物多通道荧光显微镜配备的相机进行拍照。
扫描仪扫描
· HuilanBio扫描仪采用最先进的光学和电子技术，确保每一次扫描都能捕捉到最细微的细节。我们的扫描仪能提供出色的分辨率和灵敏度，使您的研究数据更加精确和可靠。
数据分析
· 利用慧蓝生物Huilan AI分析软件进行半定量分析，记录增殖的细胞位置和数量，获得更加精准的实验数据。
提示：细胞或组织染色完成后，建议及时观察和拍摄，以确保最佳的成像效果。
实验前须知
· EdU 的分子量为252.23，易溶于水、PBS、生理盐水。
· 对于动物实验，如使用自备EdU粉末，建议将EdU粉末溶解于DMSO配制成100mg/ml 的母液。
· EdU 建议初始给药量为50mg/kg（50μg/g），稀释浓度为0.5~1mg/mL。小鼠体重20g，需要注射1mg，以1mg/mL计算，需要注射1mL。
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Edu |
0.1mg |
1mg |
2mg |
10mg |
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PBS |
100μL |
1mL |
2mL |
10mL |
· 对于细胞实验， EdU母液质量浓度为100mg/mL，转化为物质的量浓度为400mM，待使用时用细胞完全培养基和EdU母液按8000：1的比例稀释，制备适量50μM的EdU培养基（50μM为推荐浓度。由于细胞类型、培养基种类、细胞密度和增殖速度等多种因素会显著影响EdU在细胞中的掺入量。因此，在首次使用EdU时，建议对其使用浓度进行一些探索和调整。如果您之前已经使用BrdU进行过实验，可以将BrdU的终浓度作为EdU的参考浓度）
文章引用试剂盒/方法
Staining of EdU was performed using a EdU cell proliferation Assay kit ( Huilanbio Biological Technology, Shanghai, China) based on the click chemistry technology according to the manufacture’s instruction.
慧蓝生物助力广大科研客户提供一站式完整多重免疫荧光的整体解决方案。
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