1.  为什么会串色？

答：串色与多种因素有关系：

A 可能与成像设备滤光片带宽有关系，尽量选用窄波长带宽的滤光片；

B 可 能与上一轮抗体未被完全洗脱关系，对于一些亲和力比较高的抗体比如 CK 等，抗体洗脱条件需要延长（提高洗脱温度时间等）；

C 可能与信号不平衡有关系，比如相邻两个通道染料，一个强度过高，一个过低，导致强的信号发生外溢；D 其他可能存在的原因，比如抗体弄混，下一轮抗体忘记洗脱/修复等。

2.  抗原修复方式/抗体洗脱方式怎么选择？

答：第一轮抗原修复建议 9.0 EDTA,95 度 15-25min；

第二轮或以上抗体洗脱/抗原修复，建议柠檬酸 6.0，95 度 25min-40min ，针对一些容易掉片的组织，抗体洗脱可以采用抗体洗脱液（我司有卖：mIHC 专用抗体洗脱液），

PS：抗体洗脱液时间过长可能会导致抗原识别降低/DAPI核弱染，注意把控抗体洗脱液时间（ 一般室温或者37 度 5- 15min ，1-2 次能到到比较理想的结果）。

3.  TSA染料是否需要避光？

答：TSA试剂盒荧光染料抗淬灭性强，全程无需日光灯下避光，使用过程中也无需在暗环境中操作，但不能再太阳光下照射。

4.  做多标时，指标/抗体顺序如何选择？

答：难以洗脱的抗体，摆在最后一轮，不然容易串色，比较难做的指标放在前面几轮做（比如 foxp3）， 第一轮通常做适合 EDTA 9.0 修复的指标；根据我司经验，第一轮通常采用 EDTA 9.0/高压 6.0  第二轮及其以上通常采用 6.0 ，多抗建议 6.0  。

5.  为什么有时候有非特异性或者非特异是怎么产生的以及怎样改善？

答：非特异的产生有几种可能，

A：抗体是多克隆的，容易产生非特异，可以换用单克隆抗体或者降低浓 度以及修复强度来改善；

B:信号放大过强，可以降低染液反应时间或者浓度；

C：一抗浓度过高或者修复过度，采用比较低的稀释抗体比例，或降低修复强度（温度或者时间或者修复液 PH）。

6.  做石蜡切片 mIHC,抗体应该怎样选择？

答：尽量选用单克隆抗体，抗体应用选用 IHC /mIHC/ IHC-P,优先选用经过敲除验证的抗体等。

7.  慧蓝生物的试剂盒对于其他进口/国产试剂盒优势在哪里？

答：A：性价比高，试剂盒价格在 2k起；

B  稳定性好：慧蓝生物特有配方，极大提高试剂盒稳定性，室温放置一个月检测信号灵敏度无差异；

C  灵敏度高：最高灵敏度可以达到市场其他公司的 10-50 倍。

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